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質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的操作步驟你知道嗎

將質(zhì)粒 DNA 導(dǎo)入細(xì)菌的過(guò)程稱為轉(zhuǎn)化( Transformation )。此感受態(tài)細(xì)菌細(xì)胞在 CaCl 2 低滲溶液中膨脹為球狀(感受態(tài)細(xì)菌的制備,見(jiàn)前)。質(zhì)粒 DNA 與 CaCl 2 形成抗 DNase 羥基 - 磷酸鈣復(fù)合物黏附于細(xì)菌表面,經(jīng) 42℃ 短時(shí)間熱沖擊處理,促進(jìn)細(xì)胞吸收 DNA 復(fù)合物。在豐富培養(yǎng)基上生長(zhǎng)數(shù)小時(shí)后,球狀細(xì)胞復(fù)原并分裂增殖。被轉(zhuǎn)化的細(xì)菌中,外源基因得到表達(dá)。在選擇性培養(yǎng)平板上,可選出所需的轉(zhuǎn)化子(即含有質(zhì)粒 DNA 的細(xì)菌)。鈣處理的感受態(tài)細(xì)胞,一般每微克 DNA 能獲得 10 5 ~ 10 6 個(gè)轉(zhuǎn)化子。除化學(xué)方法轉(zhuǎn)化細(xì)菌外,還有電穿孔法( Electroporation ),其轉(zhuǎn)化率可高達(dá) 10 9 ~ 10 10 個(gè)轉(zhuǎn)化子 /μg 質(zhì)粒 DNA 。

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