血清滅活相關(guān)問(wèn)題解答

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血清滅活相關(guān)問(wèn)題解答

2024-08-14

1、問(wèn)：加到培養(yǎng)基中的血清必須滅活嗎？

答：不是必須的，看做什么實(shí)驗(yàn)了。

2、問(wèn)：四季青胎牛血清滅活是56℃30分鐘嗎？

答：如果用于培養(yǎng)大多數(shù)的腫瘤細(xì)胞，血清一般是不需要滅活的，這樣可以有效保存血清中的生長(zhǎng)因子。但是如果用于培養(yǎng)一些表面具有補(bǔ)體受體的細(xì)胞，如內(nèi)皮細(xì)胞，血清是需要滅活，一般是56℃，30min。

3、問(wèn)：我要做滋養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)，胎牛血清要滅活嗎？

答：進(jìn)口的一般都已滅活，國(guó)產(chǎn)的不一定，最好還是滅活一下再用較安全。

4、問(wèn)：我用病毒上清轉(zhuǎn)染細(xì)胞，培養(yǎng)用的血清需要滅活嗎？因?yàn)檠逯锌赡苡行┭a(bǔ)體和抗體，是不是會(huì)影響轉(zhuǎn)染？我想未滅活的血清中含些抗體補(bǔ)體可能會(huì)和病毒相結(jié)合，影響轉(zhuǎn)染，正確嗎？細(xì)胞是單核細(xì)胞白血病細(xì)胞，病毒是病毒包裝細(xì)胞PT67收集的病毒上清。為什么要用無(wú)血清培養(yǎng)基加病毒孵育幾小時(shí)，目的是什么？

答：血清一定要滅活，可以先用無(wú)血清培養(yǎng)基加病毒孵育幾小時(shí)以后再加血清。避免雜蛋白對(duì)病毒和宿主結(jié)合過(guò)程的干擾，一般是2-6小時(shí)，根據(jù)細(xì)胞的狀態(tài)決定。血清不一定需要滅活，滅活的目的是將血清中的補(bǔ)體滅活！這要根據(jù)實(shí)際情況而定，如果沒(méi)有把握那就滅活吧，也不麻煩56度半個(gè)小時(shí)。

5、問(wèn)：(1)我買的是杭州四季青的新生牛血清，要滅活嗎？有些說(shuō)法是需要，有些說(shuō)直接解凍后就可以加入到培養(yǎng)基中；我配制胰蛋白酶液，用的是D-PBS，有關(guān)系嗎？

答：關(guān)于血清的熱滅活，是很多人感興趣也存在一定爭(zhēng)議的話題。大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室將血清的熱滅活還是作為常規(guī)來(lái)執(zhí)行，因?yàn)橛袃蓚€(gè)作用，第一是滅活補(bǔ)體，第二是滅活血清中可能存在的支原體。但是實(shí)驗(yàn)者并沒(méi)有考慮熱處理對(duì)血清中的生長(zhǎng)因子、氨基酸等成分帶來(lái)的負(fù)面影響。

在實(shí)驗(yàn)室處理血清的時(shí)候，水浴箱在滅活過(guò)程中出現(xiàn)故障，溫度升高到80℃，血清變成了凝膠狀，重新處理另外一份血清，將兩份血清對(duì)比，發(fā)現(xiàn)高溫直接影響到血清所含的抗體蛋白。在56℃下滅活半小時(shí)以上，肯定也會(huì)對(duì)里面的蛋白起到破壞作用。熱滅活之后，血清放在四度冰箱久了，就會(huì)有沉淀產(chǎn)生，這常常會(huì)被認(rèn)為是微生物污染或者是黑膠蟲(chóng)污染。為了驗(yàn)證到底有沒(méi)有污染，常常又會(huì)把血清放置37℃溫育，但是血清中的蛋白會(huì)進(jìn)一步析出，最后還是要做鏡檢，無(wú)菌培養(yǎng)試驗(yàn)，和革蘭氏染色試驗(yàn)，非常麻煩。

有資料顯示，里面提到70%的實(shí)驗(yàn)者認(rèn)為滅活是理所當(dāng)然的。常規(guī)滅活建議的溫度在45℃到62℃之間，而時(shí)間則從15分鐘到60分鐘不等。其中最常用的手法是56℃熱處理30分鐘。隨著血清采集、處理、加工工藝的提高，許多早先認(rèn)為是熱滅活的原因已經(jīng)不再成立，只有少數(shù)對(duì)血清進(jìn)行熱滅活的研究者在實(shí)驗(yàn)中證實(shí)了這一步驟的有效性和必要性。有人比較過(guò)11個(gè)不同細(xì)胞株，發(fā)現(xiàn)其中熱滅活對(duì)6 個(gè)細(xì)胞株(HBAE，MDBK，Vero，成纖維細(xì)胞，MRC-5)的生長(zhǎng)帶來(lái)負(fù)面影響，三個(gè)細(xì)胞株(FOX-NY，MDCK和CHO-K1)不受熱滅活的影響，而只有兩個(gè)細(xì)胞株(Balb/3T3，Sp2/0Ag14 hybrid)，在熱滅活之后，細(xì)胞生長(zhǎng)有輕微的改善。所以，在正常的操作下，熱滅活通常對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)沒(méi)有明顯的促進(jìn)作用。

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