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什么是細胞的活化與復(fù)蘇?
很多小伙伴做實驗會用到細胞，那么我們在收到細胞時該如何處理呢？首先收到細胞株包裹時，請檢查細胞株冷凍管是否有解凍情形，若有請立即通知。細胞株請盡快開始培養(yǎng)，或立即冷凍保存。
細胞復(fù)蘇的原則－快速融化：
必須將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至37℃，使細胞外凍存時的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結(jié)晶，對細胞造成損害。
一. 實驗前準備：
1.將水浴鍋預(yù)熱至37℃
2.用75％酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺臺面。
3.在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養(yǎng)瓶等等。
二．取出凍存管：
1.根據(jù)細胞凍存記錄按標簽找到所需細胞的編號。
2.從液氮罐中取出細胞盒，取出所需的細胞，同時核對管外的編號。
三．迅速解凍：
1.迅速將凍存管投入到已經(jīng)預(yù)熱的水浴鍋中迅速解凍，并要不斷的搖動，使管中的液體迅速融化。
2.約1-2min后凍存管內(nèi)液體完全溶解，取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁，再拿入超凈臺內(nèi)。
四.平衡離心：
用架盤天平平衡后，放入離心機中3000r/min 離心3min
五.制備細胞懸液：
1.吸棄上清液。
2.向離心管內(nèi)加入10ml培養(yǎng)液，吹打制成細胞懸液。
六.細胞計數(shù)：
細胞濃度以5×105/ml為宜。
七、冷凍細胞解凍程序
1.依據(jù)細胞株數(shù)據(jù)單指定之基礎(chǔ)培養(yǎng)基種類、血清種類和其它指定之成份和比例，制備培養(yǎng)基。絕大多數(shù)之細胞均無法立即適應(yīng)不同之基礎(chǔ)培養(yǎng)基或不同之血清種類，若因?qū)嶒炐枰?，必須有所不同時， 務(wù)必以緩慢比例漸次改變培養(yǎng)基組成，確定細胞適應(yīng)后，方進行所需之實驗。
2.FBS(fetal bovine serum,胚牛血清),CS(calf serum, 小牛血清)和HS(horse serum,馬血清)，對細胞而言差異極大，請務(wù)必依據(jù)細胞株資料單指定之血清種類培養(yǎng)之。
3.將培養(yǎng)基置于37°C水槽中回溫，回溫后噴以70% 酒精并擦拭之，移入無菌操作臺內(nèi)。取出冷凍管，立即放入37°C 水槽中快速解凍，水面高度不可接近或高過冷凍管之蓋沿，否則易發(fā)生污染。輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化后，以70% ethanol擦拭冷凍管外部，移入無菌操作臺內(nèi)。
4.依據(jù)細胞種類和濃度，于無菌操作臺內(nèi)取10ml培養(yǎng)基加至T25或T75 flask中。取出已解凍之細胞懸浮液，緩緩加入T25或T75 flask內(nèi)之培養(yǎng)基，混合均勻，放入37°C，5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
5.對絕大多數(shù)細胞而言，1%以下之冷凍保護劑DMSO，不會對細胞之貼附或活化有不良影響，不需立刻由解凍細胞中去除，待第二天確定細胞生長或貼附良好后再去除即可。唯對極少數(shù)因?qū)MSO敏感或會造成細胞分化之細胞，需立即去除DMSO者。
你學(xué)會了嗎？