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BCA法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度

行業(yè)新聞

BCA法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度


【目的】

掌握BCA法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度的原理。

 

【原理】

BCA(bicinchonininc acid)與二價(jià)銅離子的硫酸銅等其他 試劑 組成的 試劑 ,混合一起即成為蘋果綠,即BCA工作試劑。在堿性條件下,BCA與蛋白質(zhì)結(jié)合時(shí),蛋白質(zhì)將Cu2+ 還原為Cu+ ,一個(gè)Cu+ 螯合二個(gè)BCA分子,工作試劑由原來的蘋果綠形成紫色復(fù)合物,最大光吸收強(qiáng)度與蛋白質(zhì)濃度成正比。

 

【操作】

標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:取 試管 七支、編號(hào),按下表操作:

 

【計(jì)算】

(一) 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

(二) 以測(cè)定管吸光度值,查找標(biāo)準(zhǔn)曲線,求出待測(cè)血清中蛋白質(zhì)濃度(g/L)

(三) 再從標(biāo)準(zhǔn)管中選擇一管與測(cè)定管光密度相接近者,求出待測(cè)血清中蛋白質(zhì)濃度(g/L)

 

【優(yōu)缺點(diǎn)】

() 操作簡(jiǎn)單,快速,45分鐘內(nèi)完成測(cè)定,比經(jīng)典的Lowary法快4倍且更加方便;

() 準(zhǔn)確靈敏,試劑穩(wěn)定性好,BCA試劑的蛋白質(zhì)測(cè)定范圍是20-200μg/ml,微量BCA測(cè)定范圍在0.5-10μg/ml

() 經(jīng)濟(jì)實(shí)用,除 試管 外,測(cè)定可在微板孔中就進(jìn)行,大大節(jié)約樣品和試劑用量;

() 抗試劑干擾能力比較強(qiáng),如去垢劑,尿素等均無影響

 

【器材】

(一) 7220型分光光度計(jì)

(二) 恒溫 水浴

(三) 中試管7

(四) 槍式移液管

 

【試劑】

1、 試劑A1BCA二鈉鹽

2%無水碳酸鈉

0.16%酒石酸鈉

0.4%氫氧化鈉

0.95%碳酸氫鈉

混合調(diào)PH值至11.25。

2、 試劑B4%硫酸銅。

3BCA工作液:試劑A 100ml + 試劑B 2ml混合

4、 蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液:用結(jié)晶牛 血清 白蛋白根據(jù)其純度用生理鹽水配制成1.5mg/ml的蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液。(純度可經(jīng)凱氏定氮法測(cè)定蛋白質(zhì)含量而確定)

5、 待測(cè)樣品:用雙縮脲測(cè)定法的樣品稀釋而成。


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