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技術(shù)干貨:2023ELISA實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)注意事項(xiàng)
ELISA試劑盒以其靈敏度較高，特異性好的特點(diǎn)已廣泛用于科研實(shí)驗(yàn)研究，越來(lái)越多的科研單位和高校畢業(yè)論文都選擇用ELISA試劑盒作為研究課題。優(yōu)質(zhì)的試劑，優(yōu)質(zhì)的儀器和正確的操作方法是保證ELISA試劑盒檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。但在實(shí)驗(yàn)中也有很多小細(xì)節(jié)會(huì)影響到實(shí)驗(yàn)結(jié)果，下面就和大家談?wù)剬?shí)驗(yàn)室中ELISA試劑盒的注意事項(xiàng)。
1.適宜的溫度
血清標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測(cè)，嚴(yán)重溶血標(biāo)本禁用。一般說(shuō)來(lái)，在5天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可放置于4℃，標(biāo)本在冰箱中保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致血清IgG聚合，使間接法的試劑本底加深。超過(guò)一周測(cè)定的需－20℃保存。在建立ELISA方法作反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究時(shí)，實(shí)驗(yàn)表明，兩次抗原抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)1-2小時(shí)，產(chǎn)物的生成可達(dá)頂峰。為避免蒸發(fā)，板上應(yīng)加蓋，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔，反應(yīng)板不宜疊放，以保證各板的溫度都能迅速平衡。應(yīng)注意溫育的溫度和時(shí)間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確。由于公司的試劑盒溫育是在空氣浴中完成，采用水浴會(huì)造成值偏高或花板。另外溫育中還有邊緣效應(yīng)，邊上的值會(huì)偏高，建議為了客觀的判斷結(jié)果，將質(zhì)控放在非邊緣位置。
2.如何處理
凍結(jié)血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混勻并避免產(chǎn)生氣泡?；鞚峄蛴谐恋淼难鍢?biāo)本應(yīng)先離心或過(guò)濾，澄清后再檢測(cè)。反復(fù)凍融會(huì)使抗體效價(jià)跌落，所以測(cè)抗體的血清標(biāo)本如需保存作多次檢測(cè)，宜少量分裝冰存；使用一次性玻璃試管或真空管采血管；并使用非抗凝標(biāo)本，肝素抗凝血漿會(huì)增加OD值，可能與高濃度肝素具有強(qiáng)大的負(fù)電荷能吸附酶標(biāo)記物不易洗脫有關(guān)；EDTA、酶抑制劑（如NaN3）可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過(guò)氧化物酶活性。
3.關(guān)于采集
血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清，或標(biāo)本采集時(shí)用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當(dāng)?shù)拇倌齽?/span>
4.有效期
通常在沒有開封，有效期為6個(gè)月，但根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，試劑盒內(nèi)酶標(biāo)條可拆卸，按實(shí)驗(yàn)需求可分多次使用；使用后的剩余試劑盒建議在實(shí)驗(yàn)后1個(gè)月內(nèi)使用完畢。產(chǎn)品過(guò)期時(shí)間以盒子上的標(biāo)簽為準(zhǔn)，保質(zhì)期內(nèi)所有組分都確保是穩(wěn)定的。
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小鼠白介素4(IL-4)ELISA試劑盒
小鼠白介素17A(IL-17A)ELISA試劑盒
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