行業(yè)新聞
實(shí)驗(yàn)筆記之ELISA實(shí)驗(yàn)常見問題解答
1971年Engvall和Perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）用于IgG定量測(cè)定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測(cè)定方法。這一方法的基本原理是：①使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體，這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí)，把受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開，最后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺有無定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，故可極大地放大反應(yīng)效果，從而使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。
ELISA實(shí)驗(yàn)原理簡(jiǎn)單，步驟少，流程短，試劑盒操作相對(duì)簡(jiǎn)便，實(shí)驗(yàn)小白也能輕松上手。然而，實(shí)驗(yàn)上手雖快，想要得到可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，卻并不那么容易。為了更好地助力科研實(shí)驗(yàn)，恒遠(yuǎn)生物在這里將大家關(guān)心的ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)的常見問題整理如下：
一、關(guān)于試劑盒：
1.你們的ELISA試劑盒能檢測(cè)什么物種？
目前我們的試劑盒檢測(cè)的種屬主要為人、小鼠、大鼠、猴、兔、豬、雞、植物等，種屬齊全。如果試劑盒的命名帶有特定指向（如人），代表專門針對(duì)此物種；沒有指明物種，則代表該試劑盒在目前公司產(chǎn)品涉及的種屬（例如人、小鼠、大鼠、猴、兔等）內(nèi)通用；其他特殊種屬的檢測(cè)適用性，請(qǐng)聯(lián)系技術(shù)支持確認(rèn)。
2.96TELISA試劑盒能檢測(cè)多少樣本？是否需要做復(fù)孔？
為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，我們建議標(biāo)準(zhǔn)品和樣品都做復(fù)孔，但并不強(qiáng)行要求ELISA實(shí)驗(yàn)一定要做復(fù)孔/3復(fù)孔，客戶可根據(jù)自己的需求設(shè)定復(fù)孔實(shí)驗(yàn)，具體實(shí)驗(yàn)情況可咨詢恒遠(yuǎn)生物技術(shù)指導(dǎo)。
3.需檢測(cè)的樣品較多，能否減少標(biāo)曲的孔數(shù)？
為保證結(jié)果的準(zhǔn)確度，不建議減少標(biāo)曲的孔數(shù)，請(qǐng)確保能夠檢測(cè)至少6個(gè)不同的標(biāo)準(zhǔn)品濃度（含空白孔)。
4.ELISA試劑盒要使用多次，但樣本較多，是否可以只做一次標(biāo)曲？
雖然ELISA實(shí)驗(yàn)的操作步驟相同，但每次實(shí)驗(yàn)的各種影響因素都會(huì)有所變化。所以，每次實(shí)驗(yàn)時(shí)，都必須重新繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，以得到更準(zhǔn)確可靠的檢測(cè)結(jié)果。如果需要做多次實(shí)驗(yàn)，溶解后的最高濃度標(biāo)準(zhǔn)品可以分裝保存于-20℃條件下，避免反復(fù)凍融，半個(gè)月內(nèi)使用有效。
二、關(guān)于樣本
1.血清血漿樣本應(yīng)該選用哪種真空采血管收集？
血清：不含抗凝劑的采血管/含促凝劑采血管（通常為紅色、黃色、橘色管蓋的采血管）
血漿：含抗凝劑的采血管（通常為綠色、紫色管蓋的采血管）
樣品收集后，若在1周內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)，可保存于2-8℃條件下；若不能及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次使用量分裝，凍存于-20℃條件下（1個(gè)月內(nèi)檢測(cè)）或-80℃條件下（3個(gè)月內(nèi)檢測(cè)），避免反復(fù)凍融。檢測(cè)前，應(yīng)緩慢融化冷凍過的樣本，并離心除去凍融過程中產(chǎn)生的沉淀物。
2. 采集時(shí)，如何盡可能避免溶血現(xiàn)象？
溶血可由多種理化因素和毒素引起。在體外，機(jī)械性強(qiáng)力振蕩、低溫冷凍等誘因均可引起溶血。為避免溶血對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生影響，應(yīng)注意：
（1）靜脈采血時(shí)，回抽壓力不宜過大；
（2）一次性采血量不宜過少；
（3）采集的全血不宜激烈振蕩；
（4）離心轉(zhuǎn)速不宜過大；
（5）收集的全血需盡快處理成血清/血漿，全血不能凍融；
（6）若需要麻醉采血，需使用沒有溶血作用的麻醉劑。
3.組織/細(xì)胞樣本收集中提到的“反復(fù)凍融”，過程應(yīng)該如何操作？
（1）組織樣本：組織研磨后，將其-80℃放置1h/液氮放置0.5h，再置于30℃水浴鍋中輕微振蕩，使其迅速融化，反復(fù)操作1-2次即可；
（2）細(xì)胞樣本：按上述操作步驟，反復(fù)凍融2-3次。若為膜蛋白，可以適當(dāng)做超聲處理，但需要控制好超聲的溫度、頻率；
4.怎樣判斷我的樣本是否需要稀釋或做其他處理？
試劑盒的檢測(cè)范圍不等同于樣本中待測(cè)物的濃度范圍，建議實(shí)驗(yàn)前通過相關(guān)文獻(xiàn)預(yù)估樣本中待測(cè)物的濃度，并通過預(yù)實(shí)驗(yàn)確定樣本的實(shí)際濃度情況。如果是常規(guī)樣本類型，可以咨詢ELISA技術(shù)支持，以獲取樣本的推薦稀釋倍數(shù)，并安排預(yù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)；如果樣品中待測(cè)物的濃度過高或過低，請(qǐng)對(duì)樣本做適當(dāng)?shù)南♂尰驖饪s；如果樣本中的分析物濃度遠(yuǎn)低于試劑盒的最低檢測(cè)限，建議選擇靈敏度更高的試劑盒來檢測(cè)。
新聞中心
最新新聞
- 檢測(cè)細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的方法
- 血清出現(xiàn)沉淀的原因及影響
- 喜報(bào):恭賀武漢理工大學(xué)老師領(lǐng)取獎(jiǎng)學(xué)金,SCI文獻(xiàn)18.5分！
- 微生物活性氧（ROS）ELISA試劑盒產(chǎn)品說明
- 恒遠(yuǎn)生物：2025發(fā)論文，贏獎(jiǎng)學(xué)金！
- 恒遠(yuǎn)生物|2025年勞動(dòng)節(jié)放假通知
- 一種有機(jī)化合物:丙二醛（MDA）
- 新品推薦:恒遠(yuǎn)生物四月ELISA試劑盒新增指標(biāo)推薦
- 恒遠(yuǎn)生物|三月新增ELISA試劑盒SCI文獻(xiàn),IF總分242.6!